水中總氮的測(cè)定常用堿性過(guò)硫酸鉀消解紫外分光光度法。該方法的優(yōu)點(diǎn)是步驟比較簡(jiǎn)單，所需試劑較少，所需儀器設(shè)備一般實(shí)驗(yàn)室都有。做總氮空白實(shí)驗(yàn)不僅與試劑有關(guān)，還與實(shí)驗(yàn)用水、器具、家用高壓鍋或醫(yī)用便攜式蒸汽滅菌器的壓力、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、方法步驟等因素密切相關(guān)。
1、試劑制備和儲(chǔ)存
堿性過(guò)硫酸鉀的制備過(guò)程非常重要。如果掌握不好，會(huì)影響消解效果，對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響。中關(guān)于堿性過(guò)硫酸鉀的配制，只是簡(jiǎn)單的說(shuō)是將過(guò)硫酸鉀和氫氧化鈉溶于水，沒(méi)有做其他要求。事實(shí)上，過(guò)硫酸鉀的溶解速度很慢。要想加速溶解，千萬(wàn)不能盲目加熱。即使加熱，最好采用水浴加熱方式，水浴溫度必須低于60℃，否則過(guò)硫酸鉀會(huì)分解失效。配制溶液時(shí)，可分別稱取過(guò)硫酸鉀和氫氧化鈉，兩者分別配制，然后混合定容，或先配制氫氧化鈉溶液，待溫度降至室溫后加入過(guò)硫酸鉀至溶解。若二者在燒杯中溶于水，則應(yīng)緩慢加水，同時(shí)攪拌，防止氫氧化鈉放熱，使溶液溫度過(guò)高，造成局部過(guò)硫酸鉀失效。
過(guò)硫酸鉀的貯存也應(yīng)注意。應(yīng)避免與還原性物質(zhì)、硫、磷等混儲(chǔ)。此外，過(guò)硫酸鉀易吸濕放出氧氣。因此，為防止發(fā)生故障，應(yīng)將其放置在干燥的試劑柜中。
2、無(wú)氨水的制備
實(shí)驗(yàn)過(guò)程對(duì)水的要求非常嚴(yán)格，普通的蒸餾水往往達(dá)不到實(shí)驗(yàn)要求。這時(shí)就需要進(jìn)行二次處理，得到無(wú)氨水。用蒸餾法制備無(wú)氨水時(shí)規(guī)定：“棄去前50ml餾出液，再將餾出液收集于帶玻璃塞的玻璃瓶中”。
3、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境
總氮的分析應(yīng)在無(wú)氨的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中進(jìn)行。室內(nèi)不應(yīng)有灰塵、石油和其他含氮化合物。對(duì)于本項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室的總氮項(xiàng)目分析，所用試劑和玻璃器皿也應(yīng)分開(kāi)存放，避免交叉污染，影響空白值。
4、玻璃器皿的清洗
所用玻璃器皿應(yīng)先用（1+9）鹽酸浸泡，再用無(wú)氨水漂洗數(shù)次后再使用，否則也會(huì)造成空白值偏高或平行度較高的不良情況。
5、消化溫度和壓力的控制
對(duì)于使用醫(yī)用便攜式蒸汽滅菌器的實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)測(cè)壓力為1.1~1.4kg/cm2，溫度為120℃~124℃，此時(shí)可加裝穩(wěn)壓器，將壓力控制在該范圍內(nèi)，從而節(jié)省免去手動(dòng)切斷電源控制的麻煩，穩(wěn)定省力。
六、比色法注意事項(xiàng)
本項(xiàng)目的測(cè)量涉及兩個(gè)波長(zhǎng)（220nm和275nm），有條件的實(shí)驗(yàn)室可以使用雙光路紫外分光光度計(jì)，優(yōu)點(diǎn)是方便快捷，可以避免反復(fù)調(diào)整波長(zhǎng)產(chǎn)生測(cè)量誤差，并且菜肴錯(cuò)誤也可以自動(dòng)糾正。如果沒(méi)有雙光路光度計(jì)，建議在測(cè)量一組樣品的相同波長(zhǎng)后，調(diào)整到另一個(gè)波長(zhǎng)進(jìn)行統(tǒng)一測(cè)量。一個(gè)樣品測(cè)完兩個(gè)吸光度后不要換另一個(gè)樣品，重復(fù)調(diào)整波長(zhǎng)。會(huì)造成一定的測(cè)量誤差。
七、試劑選擇
過(guò)硫酸鉀是堿性過(guò)硫酸鉀消解和紫外分光光度法測(cè)定總氮過(guò)程中的關(guān)鍵試劑。首先，試劑的純度關(guān)系到空白值的高低和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。一般分析純過(guò)硫酸鉀的總氮含量最高不超過(guò)0.005%。但由于試劑質(zhì)量差異，部分廠家和試劑批次往往達(dá)不到這一要求，導(dǎo)致空白值偏高。此外，雖然分析純氫氧化鈉的含氮量遠(yuǎn)低于過(guò)硫酸鉀，但應(yīng)慎重選擇。筆者在工作中曾遇到過(guò)過(guò)硫酸鉀溶液和氫氧化鈉溶液混合成堿性過(guò)硫酸鉀溶液時(shí)，散發(fā)出氨水氣味的現(xiàn)象，這說(shuō)明試劑的純度不夠。因此，如果條件允許，建議使用優(yōu)級(jí)純或參比試劑，盡量減少試劑中的濃度。氮含量，從而降低實(shí)驗(yàn)空白值。
8、實(shí)驗(yàn)用水和試劑的質(zhì)量檢驗(yàn)
如果實(shí)驗(yàn)空白值不理想，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)用水和試劑進(jìn)行檢測(cè)，選擇含氮量最低的水和試劑，以獲得理想的空白值。筆者的經(jīng)驗(yàn)是，每次換一種水，每次換廠家，換一批次的過(guò)硫酸鉀和氫氧化鈉試劑，做全過(guò)程的總氮會(huì)很麻煩，而且往往很難得到最終的總氮。綜上所述。下面總結(jié)的簡(jiǎn)單方法，僅供參考。
8.1 水質(zhì)檢驗(yàn)：將所有待選實(shí)驗(yàn)水放入石英比色皿中，分別在220nm和275nm波長(zhǎng)處測(cè)量其吸光度，并根據(jù)A220nm-2A275nm校正吸光度，使校正后的吸光度值最小的水為實(shí)驗(yàn)水。
8.2 試劑檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)時(shí)將待測(cè)過(guò)硫酸鉀和氫氧化鈉按其在溶液中的含量消解、定容后全部制成相應(yīng)濃度的溶液，以該溶液為試樣，測(cè)定氨的吸光度。氮和硝態(tài)氮，吸光度最低的可以用。如有必要，可進(jìn)一步計(jì)算氮含量。